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二甲基黃屬于親脂性偶氮染料,用作顯色劑可測定硒、釕、碘、砷、銅和溴酸根等。工業(yè)上常用于油漆、鞋油和紡織品等的染色。因具神經(jīng)及生殖毒性,長期攝取二甲基黃會增加罹患肝癌、肺癌、膀胱癌風(fēng)險(xiǎn),癌癥研究署(IARC)已將其列為2B等級的致癌物,禁止作為食品添加劑使用。但是,我國中國臺灣地區(qū)不斷報(bào)道出在豆干中檢出了二甲基黃。
目前二甲基黃的測定方法主要有氣相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法,固相萃取-超液相串聯(lián)質(zhì)譜。我們采用的是固相萃取-超液相串聯(lián)質(zhì)譜。
迪馬科技開發(fā)的《食品中二甲基黃的測定》采用固相萃取-超液相串聯(lián)質(zhì)譜測定食品中的二甲基黃,以乙酸乙酯和水為提取液,采用ProElut DMY固相萃取柱凈化樣品,通過UPLC檢測;本方案前處理步驟簡便、操作簡單、凈化效果好,重現(xiàn)性好,回收率高。
以下為詳細(xì)解決方案,敬請參考!
1、適用范圍
適用于豆干、糕點(diǎn)和餅干中二甲基黃的檢測,方法檢出限是0.03 µg/kg,定量限是0.1 µg/kg。
2、提取
取1.0 g樣品(易乳化的樣品需加1.0 g氯化鈉),加入2 mL水,渦旋混勻,加入5 mL乙酸乙酯,振蕩5 min,6000 rpm下離心2 min,精密量取2.5 mL上清液待凈化。
3、凈化——ProElut DMY 3 mL(Cat.# 65914)
a活 化: | 3 mL乙酸乙酯活化; |
b上 樣: c淋 洗: | 加入待凈化液,棄去流出液; 加入3 mL乙酸乙酯,棄去流出液(推干小柱); |
d洗 脫: | 加入4 mL10%氨水甲醇,收集流出液; |
e重新溶解: | 將流出液在50 ℃下氮吹至干,用流動相定容至1 mL,過0.22 µm微孔濾膜,供LC-MS分析。 |
4、色譜條件
4.1 UPLC 條件:
色譜柱:Endeavosil C18,100 × 2.1 mm,1.8 μm (Cat#:87003)
流 速:0.2 mL/min
進(jìn)樣量:5 μL
柱 溫:35 ℃
流動相: A:0.1%甲酸水 B:乙腈 A:B=20:80
4.2 質(zhì)譜條件:
電離模式:ESI 掃描方式:正離子掃描
檢測方式:多反應(yīng)監(jiān)測 電噴霧電壓:5500 V
霧化氣壓力:50 psi 輔助氣壓力:50 psi
氣簾氣壓力:20 psi 離子源溫度:500 ℃
定性離子對、定量離子對、碰撞氣能量及去簇電壓見下表
目標(biāo)物 | 定性離子對 | 定量離子對 | 碰撞氣能量/eV | 去簇電壓/ V |
(m/z) | (m/z) | |||
(母離子/子離子) | (母離子/子離子) | |||
二甲基黃 | 226.3/77.2 | 226.2/77.2 | 30 | 74 |
226.3/134.1 | 30 |
5、添加回收結(jié)果
食品中二甲基黃的LC-MS檢測添加回收結(jié)果
基質(zhì) | 添加水平(µg/kg) | 回收率(%) |
豆干 | 1.0 | 100.08 |
糕點(diǎn) | 1.0 | 90.75 |
餅干 | 1.0 | 108.63 |
二甲基黃(0.5 µg/L)多反應(yīng)監(jiān)測色譜圖
添加水平為1.0 µg/kg豆干中二甲基黃檢測的多反應(yīng)監(jiān)測色譜圖
添加水平為1.0 µg/kg糕點(diǎn)中二甲基黃檢測的多反應(yīng)監(jiān)測色譜圖
添加水平為1.0 µg/kg餅干中二甲基黃檢測的多反應(yīng)監(jiān)測色譜圖
食品中二甲基黃的測定相關(guān)產(chǎn)品信息:
貨號 | 名稱 | 規(guī)格 |
樣品前處理 | ||
65914 | ProElut DMY | 3 mL, 50/pk |
244358 | 12管防交叉污染真空SPE萃取裝置 | 12位 |
4803 | 1,3,6mL柱管通用連接器 | 15/pk |
4806 | 考克(控制流量) | 15/pk |
99011 | 真空/正壓兩用泵,無油 | 1/pk |
99013 | 抽濾瓶套裝 (包括硅橡膠管2米,2L抽濾瓶及橡膠塞) | 1/pk |
30039 | FitMax針頭式過濾器 Nylon | 13 mm,0.22 μm 100/pk |
30040 | FitMax針頭式過濾器 Nylon | 13 mm,0.45 μm 100/pk |
標(biāo)準(zhǔn)品 | ||
12-N-12774-100MG | 二甲基黃[60-11-7] | 100 mg |
色譜柱及保護(hù)柱 | ||
87003 | 超液相色譜柱 Endeavosil C18 | 100 × 2.1 mm,1.8 μm |
HPLC溶劑?緩沖鹽?離子對試劑 | ||
50144 | 甲酸 HPLC級 | 50 mL |
50101 | 乙腈 HPLC級 | 4 L |
50102 | 甲醇 HPLC級 | 4 L |
50104 | 乙酸乙酯 HPLC級 | 4 L |
通用色譜產(chǎn)品 | ||
52401B | 瓶架/藍(lán)色(現(xiàn)貨) | 50孔 |
52401A | 瓶架/白色(現(xiàn)貨) | 50孔 |
1034 | 樣品瓶(棕色/螺紋) | 2 mL, 100/pk |
1035 | 樣品瓶蓋/含墊(已經(jīng)組裝) | 100/pk |
H80465 | HPLC 進(jìn)樣針 | 25 μL |
紅色產(chǎn)品貨號#30039、#30040、#1034、#1035*
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