C18色譜柱是一種常見的液相色譜柱,廣泛應(yīng)用于分析和純化有機(jī)化合物。
一、結(jié)構(gòu)
通常由石英或玻璃制成,柱身內(nèi)壁被涂上一層由十八烷基硅烷(C18)組成的固定相。C18固定相是一種長鏈烷基官能化硅烷,在分離過程中起到吸附分離作用。
二、原理
在C18色譜柱中,樣品溶解在流動相中,然后通過柱內(nèi)涂層的C18固定相。在這個過程中,樣品中的分子與C18固定相之間發(fā)生了靜電相互作用、范德華力和氫鍵等相互作用,使得不同成分的分子在固定相表面停留時間不同,從而實現(xiàn)分離。
三、工作原理
工作時,樣品先通過進(jìn)樣口進(jìn)入柱體。然后,在移動相的推動下,樣品溶液沿柱體內(nèi)壁流動。在這個過程中,樣品分子與C18固定相之間的相互作用發(fā)生改變,不同成分的分子會在柱體內(nèi)停留的時間不同,并逐漸分離出來。
四、應(yīng)用
1.分析有機(jī)物質(zhì)
主要用于分析有機(jī)物質(zhì),如藥物、天然產(chǎn)物、化妝品等。其具有高分離效率、廣泛的應(yīng)用范圍和較長的使用壽命等優(yōu)點。
2.生物制品純化
還可以用于生物制品的純化,如蛋白質(zhì)、肽等。由于其具有較高的選擇性和靈敏度,因此在生物制品純化領(lǐng)域得到了廣泛應(yīng)用。
3.分析環(huán)境污染物
也可用于分析環(huán)境污染物,如農(nóng)藥、有機(jī)溶劑等。其高效的分離能力和選擇性使其成為分析環(huán)境污染物的理想工具。
五、注意事項
在使用C18色譜柱時,需要注意以下幾點:
1.保持柱體干燥
C18固定相對水敏感,因此需要避免柱體潮濕,以免影響分離效果。
2.避免超載
在樣品進(jìn)入柱體前,需要對樣品進(jìn)行預(yù)處理,并避免超過柱子的較大負(fù)荷容量,以保證分離效果。
3.選擇合適的流動相
不同的樣品需要選擇不同的流動相,并且流速也需根據(jù)實驗要求進(jìn)行調(diào)整,以達(dá)到較佳效果。